单细胞悬液制备流程

一、单细胞悬液制备流程

(以一般的哺乳动物组织为例)

1、用灭菌的剪刀或手术剪将组织切成小块,

2、在冰上将组织块儿加入适当的RPMI 1640培养基或PBS缓冲液，清洗至少3次，去除多余血*和杂贪。

3、将洗干净的组织剪碎，剪的越碎越好，增大和消化试剂接触的面积。加入适量的消化试剂。(这里推荐使用我公司的哺乳动物组织通用解离华体会hth体育app在线登录，按照说明书操作即可。)颠倒混。

4、放置于酶作用的最佳温度下，一般37℃℃，进行孵育，每隔5分钟震荡混匀。

5、不同类型、状态的组织消化时间不同，每隔一定的时间质检一次细胞悬液，根据细胞总量及活性等确定消化停止时间。对于某些肿瘤组织或其他较致密结缔组织，消化时间4~48h，对于容易消化的组织可以采用37℃消化15-45分钟，也可以根据具体情况而定。如组织块已分散而失去块的形状，一经摇动即成细胞团或单个细胞，可以认为已消化充分。

6、消化完成后，用合适的细胞筛进行过滤，收集滤液。

7、让细胞沉降并倒出多余的含酶液体。

8、用PBS缓冲液 洗涤并重复2-3次。加入适当的培养基或缓冲液，重悬细胞。

9、用细胞计数仪对细胞悬液进行质控并记录。

注:若得到的细胞悬液中红细胞、碎片和死细胞过多，按需决定是否进行相应的去除操作。

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