Lipo 2000转染步骤(24孔板)

一、Lipo 2000介绍

赛默飞Lipo2000转染试剂是一种多功能转染试剂，经证明可以将各种有效载荷有效地转染到各种贴壁和悬浮细胞系中。

二、Lipo 2000转染步骤

1.转染前一天，胰酶消化细胞并计数(0.5-2x105)细胞铺板，使其在转染日密度为90-95%。细胞铺板在0.5 ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。2.对于每孔细胞，使用50 ul无血清培养基(如OPTI-MEM I培养基)稀释0.8-1.0ugDNA，轻轻混匀。

3.使用前将Lipofectamine 2000转染试剂轻轻混匀，用50ul无血清培养基(如OPTIMEM I培养基)稀释1-3 ul Lipofectamine 2000转染试剂，轻轻混匀。Lipofectamine2000稀释后，在5分钟内同稀释的DNA混合(<30分钟)。NOTE:若使用DMEM培养基，则需在5分钟内同稀释的DNA混合。4.混合稀释的DNA(第二步)和稀释的Lipofectamine 2000(第三步)。室温放置20分钟。

5.(optional)将24孔板中的旧营养液吸出，用无血清培养基清洗两次。加入0.5ml无血清配养基。

6.直接将复合物加入到每孔中，摇动培养板，轻轻混匀。

7.在37℃，5%CO2中保温24-48小时。无需去掉复合物或更换培养基。或者在4-5小时后更换培养生长基也不会降低转染活性。

8.在细胞中加入复合物24-72小时后，分析细胞抽提物或进行原位细胞染色，检测报告基因活性。这依赖于细胞类型和启动子活性。对稳定表达，在开始转染一天后将细胞传代至新鲜培养基中，两天后加入筛选抗生素。进行稳定表达需要数天或数周。贴壁细胞的稳定转染:

转染后24小时，将细胞以>1:10的比例传代至新鲜培养基中，次日加入选择性培养基。

三、Lipo2000购买渠道

赛默飞代理——hth体育官方下载，公司产品线涉及细胞与基因治疗、免疫学、分子生物学、细胞生物学等多个方向，专注于生命科学试剂、耗材、细胞、仪器等产品销售。