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022-66387942以下是针对 HyClone 胎牛血清 的沉淀处理与使用建议的详细指南,帮助您高效解决问题并确保实验稳定性:
一、HyClone血清沉淀的常见类型与判断
沉淀类型 | 特征 | 是否影响实验 |
纤维蛋白絮状物 | 白色絮状或丝状漂浮物,37°C可溶解 | 通常不影响,过滤后可用 |
磷酸钙结晶 | 显微镜下可见细微颗粒,解冻后浑浊 | 可能干扰光学检测,建议过滤 |
变性蛋白/脂质 | 黄色浑浊或块状沉淀,37°C不溶解 | 可能影响细胞活性,建议停用 |
二、HyClone血清沉淀处理步骤
1. 常规处理方法(适用于正常沉淀)
解冻与溶解:
将血清从-20°C转移至 4°C冰箱过夜缓慢解冻(避免高温快速解冻)。
若需快速解冻,可置于 37°C水浴,每隔5分钟轻轻摇晃,总时间不超过30分钟。
混匀与静置:
解冻后轻柔摇匀,避免剧烈震荡(防止脂蛋白氧化)。
若有少量絮状物,将血清在 4°C静置1-2小时,沉淀会沉至管底。
分装上清:
用无菌移液管小心吸取上清液,避免触及底部沉淀。
剩余含沉淀的血清可丢弃或单独标记备用(如非敏感实验)。
2. 过滤处理(针对顽固或敏感实验)
适用场景:干细胞培养、病毒生产、荧光检测等对纯度要求高的实验。
操作步骤:
使用 0.22μm孔径无菌滤膜(推荐低蛋白吸附材质,如PES膜)。
在超净台中将血清通过滤器缓慢过滤至新无菌管中。
过滤后分装,立即冻存。
3. 异常沉淀处理(疑似变质)
特征:沉淀无法溶解、血清变色(发红/发黑)、浑浊或有异味。
【操作】
立即停止使用,记录批号并拍照留存。
联系供应商(如Cytiva或授权经销商)提供质检报告或退换货。
三、HyClone血清使用建议与预防措施
1. 分装与储存
分装体积:按实验需求分装为 10ml/管或50ml/管(减少反复冻融次数)。
冻存条件:-20°C保存(避免-80°C,jiduan低温可能增加沉淀风险)。
开封后保存:
4°C短期存放不超过 1个月,使用时避免频繁取出回温。
长期未用完建议重新分装冻存。
2. 解冻与混匀技巧
推荐方法:
4°C过夜解冻 → 室温平衡15分钟 → 轻柔旋转混匀。
避免操作:
高温水浴超过30分钟(加速蛋白变性)。
剧烈震荡或涡旋(导致脂质氧化和泡沫生成)。
3. 沉淀预防措施
减少冻融次数:每次冻融可能析出5-10%的沉淀,建议分装后单次使用。
避免温度波动:冻存血清尽量放置于冰箱稳定区域(远离冰箱门)。
选择低沉淀型号:
型号(如HyClone SH30070)经过超滤处理,沉淀更少。
γ-照射处理型号(如SV30087)可降低生物负荷,但可能略微增加沉淀。
四、HyClone血清不同实验场景的优化建议
实验类型 | 推荐操作 | 注意事项 |
常规细胞培养 | 直接使用静置后的上清液 | 定期显微镜观察细胞状态 |
干细胞/原代细胞 | 必须过滤(0.22μm)或选择预过滤血清(SH30070) | 检测克隆形成率和分化能力 |
荧光定量检测 | 过滤后使用,避免颗粒干扰光信号 | 同步设置空白对照(含血清培养基) |
大规模生产 | 使用工业级大包装(如500ml/瓶),分装前预过滤 | 验证批次一致性 |
五、HyClone血清常见问题解答
Q1:过滤会损失血清中的生长因子吗?
答:0.22μm过滤可能截留部分大分子复合物,但对多数生长因子(如EGF、FGF)影响较小。若担心活性损失,可选择HyClone预过滤血清或减少过滤体积。
Q2:血清沉淀是否意味质量问题?
答:少量沉淀(尤其是纤维蛋白)是正常现象,与生产工艺相关,不代表产品失效。需结合细胞生长测试判断。
Q3:如何评估新批次血清是否适用?
答:进行 细胞增殖实验:
使用新旧批次血清平行培养细胞(如HEK293)。
比较细胞贴壁率、倍增时间和形态。
若差异显著,联系供应商协商更换。
六、紧急情况处理
细胞突然死亡:立即停用血清,换用已知良好的旧批次或培养基基础液维持,排查其他污染源(如支原体)。
批量沉淀问题:联系HyClone技术支持(Cytiva提交工单),提供批号、储存条件及沉淀照片。
通过以上处理与预防措施,可减少HyClone血清沉淀对实验的影响。如需特定型号的详细参数或替代方案,请提供实验具体需求!
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