polyscience24765转染步骤

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以6孔板细胞培养转染为例:

使用细胞培养液3ml，DNA质粒3ug，PEI转染试剂9ug。可以根据不同细胞特性，增加DNA和PEI使用量。
一、细胞培养

1. 转染前24 h左右对细胞进行传代，接种密度约为1 - 3 × 105 cells/well。细胞接种密度，大约在60%左右。

2. 过夜培养。
3. 吸出培养液，使用新鲜培养液清洗3-4次。然后，加入2.7 ml新鲜配置的wanquan培养基。因为细胞过夜生长的分泌物有可能影响转染效率，所有建议进行细胞清洗操作。更换新鲜培养液，有助于转染后的细胞表达和生长，防止细胞营养的不足。
    也可以不吸出培养液，不更换新鲜培养液，直接进行细胞转染。
4. 当细胞汇合度达到60% - 80%时，转染可以取得较高的转染效率。
二、PEI/DNA复合物配置
1. 在1.5 ml无菌离心管中加入150 μl opti-MEM无血清培养基，并加入3 ug DNA质粒，用移液器轻轻混匀。

2. 在1.5 ml无菌离心管中加入150 μl opti-MEM无血清培养基，并加入9 ug PEI转染试剂储存液，用移液器轻轻混匀。

3. 将PEI-opti-MEM滴加至DNA-opti-MEM中，用移液器轻轻混匀，室温静置15 - 30 min后可用于转染。注意：形成的PEI/DNA复合物溶液尽量在30 min内使用。
4. PEI/DNA复合物的形成，一定是分别在无血清培养基中稀释后，再进行混匀。血清的存在会干扰复合物的形成。

三、细胞转染
1. 将PEI/DNA复合物混合液滴加至6孔板培养基中，轻轻晃动吹打培养液使PEI/DNA复合物均匀分散。
2. 过夜培养24-72小时。

四、初始转染条件

五、PEI转染效率

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