蛋白表达实验的时，有时候实验会觉得参考实验方法和克隆的蛋白基因序列wan全没有问题，但蛋白电泳就是没有结果。下面让我们一起来看看蛋白表达的常见问题有哪些吧！1、载体构建错误，很多克隆新人经常弄错读码框。比如Qiagen的pQE系列载体，其克隆位点常有一两个碱基的区别；另外有些酶产生粘端有些酶产生平端，这些都容易导致读码框错误，从而表达不出来。2、宿主菌选择不当，不同的宿主菌其基因型是不一样的。有些经过特殊修饰的载体，或者特殊用途的载体，或者有特殊启动子的载体，必须选择合适的宿...

你知道PCR反应体系主要包含那些吗？让我们一起来看看吧！一、模板（template)模板即扩增用的DNA，可以是任何来源DNA(如基因组DNA、质粒DNA等)或RNA（如总RNA、mRNA、tRNA、rRNA、病毒RNA等），但必须符合两个条件：一是纯度必须较高，二是浓度不能太高以免抑制。模板是待扩增的目的基因或特异片段，如诊断病人是否携带有突变基因时，其模板就是提取的病人血液中的DNA或RNA片段。PCR对模板DNA的纯度不要求很高，但应尽量不含有对PCR反应有抑制作用的杂...

你知道PCR技术的基本原理、各步骤的目的是什么吗？让我们一起来看看吧！一、PCR技术基本原理PCR是一种选择性体外快速扩增DNA片段的方法。在体外以类似于细胞内DNA的半保留复制过程，以拟扩增的模板DNA分子，与模板DNA互补的寡核苷酸引物、DNA聚合酶、4种dNTP及适合的缓冲体系组成的反应体系，经过重复地变性一退火一延伸三步，扩增新的目的DNA链，这个过程通过控制反应体系的温度来实现。PCR包含下列三步反应：1、变性(denaturation)将反应体系混合物经加热至94...

免疫组化实验看似容易，但真想把结果做漂亮，还是需要花上很长一段时间去积累和摸索经验。一味按照网上操作流程来做，结果往往并不理想，最终结果未能达到预期的效果。那么如何选择免疫组化实验中的一抗呢？让我们一起来看看吧！一、单克隆和多克隆抗体的选择存在于抗原表面的，决定抗原特异性的特殊化学基团称为抗原决定簇，又称抗原表位。一个抗原可以有一种或多种不同的抗原表位，每种表位只有一种抗原特异性。用一种包含多种抗原决定簇的抗原免疫动物，可刺激机体多个B细胞克隆产生针对多种抗原表位的抗体，就是...

你知道细胞胞内染色操作流程是什么吗？让我们一起来看看吧！一、细胞计数将培养好的细胞收集于15mL离心管并计数；500g离心4min，去上清。二、制备单细胞悬液将收集的细胞用1mL0.5%BSA/PBS溶液重悬，400g离心3min，去上清，重复2次；用0.5%BSA/PBS溶液重悬细胞至浓度1x106个细胞/mL，分配到96孔板中，每孔100μl细胞悬液，400g离心5min去上清。三、固定每孔加入100μl细胞固定剂重悬细胞，2-8°孵育20min。四、洗涤400g离心5m...