一、buffer是干什么的？PCRbuffer（缓冲液）的作用就是给Taq酶提供一个最适的反应条件。一般含有Tris－HCL，Mgcl2+等成分。不同的pcrbuffer成分可能不一样。二、buffer基本组分1、Tris-HCl：具有良好的缓冲能力和对多种酶的兼容性，在PCR中的主要作用是调节反应体系的pH值，使PCR反应过程维持在一个稳定的ph范围内；为酶反应提供恒定的酸碱环境，保持酶的活性，确保PCR扩增的顺利进行。2、K+：主要发挥稳定酶活性和参与模板DNA的解链作用...

一、扩增方式扩增方式一般有两种，对称扩增和不对称扩增。1、对称扩增使用等量的引物进行PCR扩增，扩增产物量随着PCR循环呈指数增长，一般的PCR，使用的都是这种方式。由于TaqDNA聚合酶具有5’-3’外切酶活性，在PCR扩增的过程中会水解探针，导致探针被耗尽，无法用于熔曲分析；若使用抗酶切修饰的探针，可一定程度降低水解，但由于探针阻碍了聚合酶通过，扩增效率会大幅下降。对称扩增产生的互补双链，会与探针竞争结合靶序列，不利于探针结合到靶序列上，熔曲分析可能会出现异常。优点：灵敏...

一、病毒滴度病毒的滴度：单位体积(通常为mL)液体中具有生物活性的病毒颗粒数。滴度是一个病毒自身复制的数量概念，可分为物理滴度和感染滴度。物理滴度是指包含病毒基因组的病毒颗粒的浓度，可以通过通过定量PCR对病毒颗粒的基因组拷贝数进行检测，也可以通过测定病毒颗粒中的特定蛋白进行定量，但物理滴度未考虑到病毒活性和感染效率，因此是不准确的。感染滴度是指成功转导细胞的病毒颗粒的浓度，须通过细胞感染实验来测定，如利用定量PCR对细胞中的病毒基因拷贝数进行检测，或通过携带荧光的病毒感染细...

上次我们分享了IHC未染色或无信号的原因分析，这次让我们来看看IHC染色不均匀是为什么吧。一、组织切片制备解释：组织切片薄厚不均匀→建议：更换刀片二、组织固定1.解释：酒精固定不足会产生伪影；→建议：延长固定时间；尝试不同的固定液2.解释：固定延迟导致抗原扩散；建议：立即固定组织；可以考虑使用交联固定剂三、脱蜡解释：脱蜡不wan全→建议：使用新鲜的二甲苯四、抗体兼容性解释：一抗可能结合其他抗原上的表位→建议：从多抗切换至单抗；尝试不同的单抗五、透化解释：细胞膜被破坏，膜蛋白丢...

IHC未染色或无信号的原因：一、‌抗体问题‌：抗体与一抗或二抗不兼容、抗体浓度不合适、抗体失效或储存不当等都会导致无染色。例如，使用抗一抗种属来源的二抗，确认二抗是否识别一抗的亚型；使用更高浓度的抗体或延长孵育时间；设置阳性对照，确保抗体仍然有效‌。二、‌抗原修复不足‌：固定步骤可能会改变抗体识别的抗原表位，导致抗原修复不足。使用微波或压力锅进行抗原修复，确保使用新鲜配置的修复液‌。三、‌样本处理不当‌：样本存放时间过长、切片制备不当（如脱蜡不ce底）、组织切片干片等都会影响...